液相色譜柱的使用方法

     “色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此，擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。色譜柱由柱管、壓帽、卡套（密封環(huán)）、篩板（濾片）、接頭、螺絲等組成，沒有色譜柱就不能進(jìn)行分離、定性與定量了，色譜柱是根據(jù)柱子里的填充物不同來區(qū)別的，填充物又是根據(jù)需要分離的物質(zhì)的極性來選擇的。

1.色譜柱的使用說明：

（1）色譜柱使用前注意事項(xiàng)：

     色譜柱的儲(chǔ)存液無特殊說明，均為評價(jià)報(bào)告所示的流動(dòng)相。在使用前，一定要注意色譜柱的儲(chǔ)存液與要分析樣品的流動(dòng)相是否互溶。在反相色譜中，如，用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應(yīng)先用10％左右的低濃度的有機(jī)相洗脫劑過渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機(jī)相中很容易析出，堵塞色譜柱。

 （2）流動(dòng)相：

     流動(dòng)相中所使用的各種有機(jī)溶劑要盡可能使用色譜純，配流動(dòng)相的水是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過0.45μm的濾膜過濾一次則更好，尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外，裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的pH值適用范圍是2.0～8.0，BDSC18適合于堿性化合物，pH值適用范圍為2.0～10.0。當(dāng)必須要在pH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時(shí)，每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲(chǔ)存并與所使用的流動(dòng)相互溶的溶劑清洗，并*置換掉原來所使用的流動(dòng)相。

 （3）樣品：

     樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過濾器或樣品預(yù)處理柱（SPE）對樣品進(jìn)行預(yù)處理；

 若樣品不便處理，要使用保護(hù)柱，在用正相色譜法分析樣品時(shí)，所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴(yán)格脫水。

2.色譜柱的保存：

 （1）反相色譜柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng)：

     使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應(yīng)該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。

 （2）長期保存色譜柱：

     如果色譜柱要長時(shí)間保存，必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲(chǔ)存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲(chǔ)存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲(chǔ)存于水（含防腐劑*或柳硫汞）中，并將購買新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上，儲(chǔ)存的溫度是室溫。

3.色譜柱的再生因?yàn)樯V柱是消耗品，隨著使用時(shí)間或進(jìn)樣次數(shù)的增加，會(huì)出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象，一般來說可能是柱效下降。

 （1）反相柱的再生：

     依次采用20～30倍的色譜柱體積的甲醇：水=10：90（V/V），乙腈，異丙醇作為流動(dòng)相沖洗色譜柱，完成后再以相反順序沖洗色譜柱。

 （2）正相柱的再生：

     依次以20～30倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動(dòng)相沖洗色譜柱，然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴(yán)格脫水。